کلونینگ و بیان cdna گرانزیمm و تعیین خصوصیات بیوشیمیایی آن

تعادل بین حیات و مرگ سلولی تحت کنترل ژنتیکی است. علائم خارج سلولی و میانجی گرهای داخل سلولی در حفظ این تعادل درگیر هستند. وقتی سلول ها تحت تاثیر آسیب بیولوژیکی، بیوشیمیایی و بیوفیزیکی قرار می گیرند، گروهی از ژن های پاسخ دهنده به تنش بیان و در نتیجه ی آن، آپوپتوز یا مرگ برنامه ریزی شده ی سلولی آغاز می گردد. دفاع در مقابل عفونت های ویروسی و سلول های توموری، به عملکرد لنفوسیت های t سلول کش و سلول های کشنده-ی طبیعی وابسته است. گرانزیمm یکی از اعضای خانواده ی سرین-پروتئازهاست که اساسا در این سلول ها بیان می-گردد. به نظر می رسد که گرانزیمm یک القاکننده ی بالقوه ی مرگ در سلول های توموری هدف باشد و ویژگی های ریخت شناسی منحصر به فردی را در مقایسه با سایر گرانزیم ها ایجاد می کند. با وجودی که cdna گرانزیمm در اوایل سال 1990 کلون شده است، اما این گرانزیم چندین سال است که به عنوان یک گرانزیم ناشناخته باقی مانده و فقط در طی چند سال گذشته به این پروتئاز توجه بیش تری شده است. بنابراین در این مطالعه cdna گرانزیمm کلون و بیان گردید. انکلوژن بادی های حل شده با استفاده از کروماتوگرافی تمایلی نیکل-آگارز خالص گردیدند و همزمان ساختار طبیعی خود را به دست آوردند. فعالیت گرانزیمm با استفاده از سوبسترای کازئین سنجیده شد و فعالیت پروتئازی آن توسط افزایش جذب در طول موج 280 نانومتر به واسطه ی تجزیه ی کازئین بررسی گردید. نتایج به دست آمده از این مطالعه نشان می دهد که پروتئین خالص شده از لحاظ زیستی فعال می باشد.